CRISPR-Cas9技術敲除酵母菌ADE1基因

【背景】

利用CRISPR-Cas9技術編輯酵母菌中的一個920bp的ADE1基因。ADE1是腺嘌呤合成相關基因,如果ADE1失活,則細胞將會積累紅色色素,呈現紅色菌落。

【方法】

  1. 質粒構建
  2. sgRNA活性檢測
  3. 挑選活性較高的sgRNA進行基因組定點編輯
  4. 利用基因功能變化、表性變化和測序等方法檢測基因定點修飾結果。

【結論】

  1. 從顏色表型變化得知,酵母菌落變成紅色菌落,可知ADE1成功敲除(圖1);
  2. 陽性克隆菌落

  3. 測序結果顯示,轉化子的ADE1基因缺失了21個堿基,被成功編輯(圖2)。
  4. 測序結果

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